田國標(biāo)：豬腸系膜上動(dòng)脈栓塞模型建立及血液學(xué)變化研究

田國標(biāo) 狄長安 王艷明 金大慶 李衛(wèi)民

【摘要】 目的 制作適合去栓治療的急性腸系膜上動(dòng)脈栓塞動(dòng)物模型，研究模型血液學(xué)變化;方法 80只成年豬體外制作動(dòng)物自體血凝塊，采用介入方法將自體血凝塊注入腸系膜上動(dòng)脈，造成動(dòng)脈栓塞，通過腹腔鏡觀察腸管血運(yùn)，觀察栓塞效果，監(jiān)測(cè)D2聚體及CK; 結(jié)果 80只實(shí)驗(yàn)豬均成功建立急性腸系膜上動(dòng)脈栓塞致腸缺血模型。栓塞后0.5h、1h、2h腔鏡下觀察腸管缺血情況，隨栓塞時(shí)間的延長，腸管損傷逐漸加重，2h時(shí)腸管已缺血壞死。栓塞模型建立后CK早期明顯升高，D2聚體持續(xù)上升，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 采用本實(shí)驗(yàn)方法可成功建立適合后續(xù)去栓治療研究的急性腸系膜上動(dòng)脈栓塞動(dòng)物模型。D2聚體、CK監(jiān)測(cè)，有助于對(duì)腸系膜上動(dòng)脈栓塞診斷。

【關(guān)鍵詞】 腸系膜上動(dòng)脈栓塞;動(dòng)物模型;D2聚體及CK

腸系膜上動(dòng)脈栓塞( superior mesenteric artery embolism， SMAE)是指栓子進(jìn)入腸系膜上動(dòng)脈，發(fā)生急性完全性血管閉塞。是外科急腹癥中較少見疾病，但該病起病急，進(jìn)展快，疾病早期無特異癥狀和體征，早期診斷比較困難，病情極其兇險(xiǎn)，病死率極高，達(dá)70%～100%[1]。預(yù)后欠佳。本實(shí)驗(yàn)通過介入方法建立一種適合后續(xù)溶栓或取栓的動(dòng)物模型，便于該病的研究。腸系膜上動(dòng)脈栓塞發(fā)生時(shí)，血清酶學(xué)檢查可見血清LDH、AKP、CK升高。近來發(fā)現(xiàn)檢測(cè)D2聚體水平有助于腸系膜上動(dòng)脈栓塞的診斷。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)腸系膜動(dòng)脈栓塞模型血液中D2聚體及CK檢測(cè)，證明D2聚體及CK有助于該病的診斷。

一、材料與方法：

1. 材料：80只成年豬，體重40-60公斤，雌豬60例，雄豬20例，均健康。

2. 方法：

2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處置

實(shí)驗(yàn)用豬術(shù)前禁食12 小時(shí)，速眠新II注射液0.2ml/kg肌肉注射麻醉后固定手術(shù)臺(tái)上，氣管插管。腹部消毒，建立氣腹，自臍上置入10mm穿刺器，建立觀察孔，置入腔鏡(便于觀察腸管血運(yùn)及蠕動(dòng)情況)。股動(dòng)脈穿刺區(qū)消毒，行股動(dòng)脈穿刺，置入超滑導(dǎo)絲，導(dǎo)絲引導(dǎo)下置入RH肝管，選擇進(jìn)入腸系膜上動(dòng)脈備用。

2.2血凝塊制作

抽豬自體靜脈20 ml，加入2.5ml 氨基已酸混合均勻，待其自凝。切成長條狀備用。

2.3模型制作

經(jīng)RH肝管將血凝塊注入腸系膜上動(dòng)脈，反復(fù)造影復(fù)查直至栓塞滿意為止(主干遠(yuǎn)端及其分支不顯影)。

2.4觀察指標(biāo)

2.4.1自腔鏡觀察0.5h、1h、2h腸管缺血情況。

2.4.2 分別于栓塞前、栓塞0.5h、1h、2h抽豬靜脈血查D2聚體水平及CK。40例.栓塞前靜脈運(yùn)用肝素12500u。40例栓塞前不運(yùn)用肝素。

2. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

監(jiān)測(cè)D2聚體水平及CK，數(shù)據(jù)采用SPSS 17. 0 統(tǒng)計(jì)軟件處理，結(jié)果用x ± s 表示，多組間比較采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的單因素方差分析。P < 0. 05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P <0. 01 表示有極顯著差異。

二、 結(jié)果：

實(shí)驗(yàn)中80頭豬均成功建立腸系膜上動(dòng)脈栓塞模型，并成功采集血液樣本。

1、腸系膜上動(dòng)脈栓塞模型情況

腔鏡下觀察：a 栓塞前腸管紅潤，蠕動(dòng)良好。b栓塞半小時(shí)后，腸管顏色無明顯改變，漿膜表面有少量滲出，蠕動(dòng)減慢：c栓塞1小時(shí)后，腸管蠕動(dòng)消失，漿膜顏色蒼白，可見較多滲出;d栓塞2小時(shí)后，腸管無蠕動(dòng)，漿膜顏色晦暗，稍黑，剪開腸管，無出血，腸管粘膜蒼白，證實(shí)腸管已缺血壞死。

2、D-二聚體變化情況

未用肝素，術(shù)前組、術(shù)后30 min組、1 h 組、術(shù)后2 h 組，Ddimer值兩兩比較均有顯著差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P < 0. 01) 。術(shù)后各組運(yùn)用肝素與未運(yùn)用肝素兩兩比較，均有顯著差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P < 0. 01) 。

二、 討論：

腸系膜上動(dòng)脈栓塞是一種少見的疾病，但其一旦發(fā)生，病情極其兇險(xiǎn)，病死率極高。制作與人體相似的腸系膜動(dòng)脈栓塞模型，為后續(xù)的治療提供一定的平臺(tái)，以便總結(jié)方法、經(jīng)驗(yàn)，指導(dǎo)臨床治療。目前已有多種急性腸缺血的動(dòng)物模型制作的報(bào)道。多數(shù)實(shí)驗(yàn)采用兔和老鼠等小動(dòng)物多用于基礎(chǔ)病理研究，而在影像學(xué)診斷及治療方法臨床應(yīng)用前評(píng)價(jià)研究則多選擇犬和豬等大動(dòng)物[3,5,6]。選擇那種動(dòng)物來制備模型，必須考慮動(dòng)物的大小與人類具有可比性,腸道血供和對(duì)缺血的耐受性應(yīng)該與人類近似[7]。犬與人類腸系膜血管差異較大，犬的周圍動(dòng)脈弓和腸壁內(nèi)存在豐富的側(cè)支循環(huán)系統(tǒng)，栓塞腸系膜上動(dòng)脈不易造成腸管缺血壞死[2]。而豬體積較大，腸系膜血管與人類較相似，故本實(shí)驗(yàn)選擇豬做為制作模型的動(dòng)物。

制作腸系膜動(dòng)脈栓塞的方法有多種。早期，主要通過開腹手術(shù)、結(jié)扎或夾閉腸系膜上動(dòng)脈建立急性腸缺血?jiǎng)游锬Ｐ蚚3,4]。此類方法建立的模型存沒有模擬機(jī)體急性腸系膜上動(dòng)脈栓塞的臨床現(xiàn)實(shí)，無法進(jìn)行后續(xù)溶栓或取栓治療，且創(chuàng)傷較大[8,9]。近些年來，隨著介入放射學(xué)的快速開展，開始嘗試微創(chuàng)介入方法建立急性腸缺血?jiǎng)游锬Ｐ?。通過股動(dòng)脈穿刺選擇性插管至腸系膜上動(dòng)脈主干或其部分分支 經(jīng)導(dǎo)管注射栓塞劑建立急性腸系膜上動(dòng)脈栓塞腸缺血?jiǎng)游锬Ｐ汀３Ｓ玫乃ㄈ麆┯胁讳P鋼圈、明膠海綿、PVC 微球顆粒等[10,11]。 介入方法建立的急性腸缺血實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型更接近臨床現(xiàn)實(shí)，但運(yùn)用上述栓塞劑，雖可成功建立缺血模型，但無法取出。這不能運(yùn)于后續(xù)溶栓、取栓等治療效果的評(píng)價(jià)。自體血凝塊是目前公認(rèn)的最客觀 最真實(shí) 最理想的栓子，因?yàn)槠湫纬蛇^程與血管內(nèi)血栓形成的過程相似。且自體血凝塊質(zhì)地疏松，適宜取栓及溶栓等后續(xù)治療。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用自體血凝塊制作栓子。

以往，腸系膜動(dòng)脈栓塞模型制備過程中，觀察栓塞效果時(shí)，多采用反復(fù)開腹觀察腸管血運(yùn)情況及提取標(biāo)本，創(chuàng)傷較大 影響對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察。本實(shí)驗(yàn)采用腹腔鏡技術(shù)，建立觀察孔觀察腸管血運(yùn)情況，最大限度地減少了創(chuàng)傷對(duì)動(dòng)物生理及對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

本實(shí)驗(yàn)選用成年豬做為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，自體血凝塊最為栓子，通過微創(chuàng)介入方法制備腸系膜動(dòng)脈栓塞模型，并運(yùn)用腹腔鏡方法觀察效果。此方法創(chuàng)傷小，高度模擬了人體的環(huán)境，成功制備了腸系膜上動(dòng)脈栓塞模型，并可模擬后續(xù)的取栓、溶栓的后續(xù)治療。此模型的建立，為未接觸或較少接觸腸系膜上動(dòng)脈栓塞患者治療的醫(yī)師提供操作技巧練習(xí)的平臺(tái)。

現(xiàn)代影像學(xué)對(duì)于該病的早期發(fā)現(xiàn)具有明顯的不足，相比之下，血清學(xué)及生化檢查具有無創(chuàng)、快速、簡便等優(yōu)勢(shì)[12]。D-dimer 是一種纖維蛋白單體的降解產(chǎn)物，由纖維蛋白溶解酶作用于血管內(nèi)外交聯(lián)纖維蛋白所產(chǎn)生。D-dimer 水平的升高在一定程度上反映出繼發(fā)性纖溶活性的增強(qiáng)。D- dimer升高常提示受檢者可能有血栓存在。本實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)栓塞模型建立30分鐘后，D- dimer顯著升高，并隨著栓塞時(shí)間延長持續(xù)升高，表明在腸系膜上動(dòng)脈栓塞時(shí)，D- dimer是一項(xiàng)比較敏感指標(biāo)，有助于該疾病的診斷。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，創(chuàng)建模型前經(jīng)靜脈給予肝素抗凝后，各觀察時(shí)期D- dimer值較未加用肝素時(shí)均有明顯下降。說明運(yùn)用肝素可顯著降低D- dimer數(shù)值，可間接證明運(yùn)用肝素可有效的阻止血栓的蔓延，肯定了肝素抗凝在腸系膜動(dòng)脈栓塞治療中的作用。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，腸系膜上動(dòng)脈栓塞時(shí)，CK會(huì)顯著升高。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，栓塞半小時(shí)后CK值明顯升高，隨著栓塞時(shí)間延長，CK值逐漸降至栓塞前水平。表明CK在栓塞早期顯著升高，在腸系膜動(dòng)脈栓塞早期診斷中有一定意義。

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